PhS-1-P 효능시험

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Phs-1-P 소개 및 효능, 효과 시험

1. 세포증식 효과 시험

사람 진피세포(Dermal Fibroblast) 세포증식효과
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사람진피세포를 이용한 세포증식 실험에서 매우 낮은 농도에서도 세포증식 효과를 보임. 신생혈관 생성 촉진과 세포증식 효과로 인해 모낭세포의 영양공급과 모낭세포의 증식을 통해 모의 성장을 촉진함.
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사람진피세포 또는 섬유아세포 (fibroblast)의증식 (세포활성화)에대한 Phs-1-P의 농도에 대한효능을 측정한 결과, 매우 낮은 농도에서 증식을 촉진하는 것을 알수있다. 즉, 0.01%에서25% 이상세포 증식효과를 나타내고 있음. 이정도의 세포증식 효과는 레티놀에 상응하는 효과임. [피토스 결과]


2. 신생혈관 생성(활성) 비교시험
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PBS : 인상완충용액, TMP : Trimethylphytosphingosine(신생혈관억제제제)

Groups 0 +/- + ++
PBS 2 8
TMP 8 2
PS-1-P 1 5 4
PhS-1-P 1 4 5

–: 강하게 신생혈관 생성 억제, -: 약하게 억제, 0: 효과 없음
+/-: 미미한 신생혈관 활성
+: 약하게 신생혈관 생성 촉진
++: 강하게 신생혈관 생성 촉진
PhS-1-P 가장 강하게 신생혈관 생성을 촉진하는 것으로 나타남.


3. 스트레스 완화작용
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PhS(phytosphingosine)는 세포독성 효과를 보이지만, PhS-1-P는 세포증식효과를 보이고 있음


S-1-P의 스트레스에 의한 세포사멸 보호효과
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Bone marrow derived macrophage (BMDM)의 배양에서 성장인자를 제거한 후 배양시키면, 24-48시간 이내에 BMDM 세포가 세포사멸을 일으킨다. 성장인자를 제거한 후에 S-1-P, LPA, 스핑고신을 처리하여 세포 증식을 관찰한 결과, S-1-P는 세포증식을 촉진하지만, 스핑고신은 세포 증식을 억제하고, LPA는 거의 효과가 없는 것으로 나타났다. 이는 세포에 스트레스를 제공하면 세포가 사멸하지만, S-1-P를 처리하면 사멸을 억제하고, 증식을 촉진한다. 따라서 S-1-P는 스트레스에 의한 세포 사멸을 억제하는 것을 알 수 있다.


피해(스트레스)를 입은 진피세포의 증식효과
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이 실험은 세포가 정상적으로 배양되는 조건이 아닌 스트레스를 받은 상태에서 Phs-1-P의 효능을 살펴보는 실험이다. 진피세포의 배양에서 탄산염 영양공급을 제한하고 삼일 후에 대조군과 Phs-1-P를 처리한 세포를 비교함. 대조군 (control)에서는 세포가 거의 보이지 않는 반면에 Phs-1-P를 투여한 경우에는 증식이 이루어지고 있음을 알 수 있음. 정상 배양조건에서도 증식효과가 나타나지만, 스트레스를 제공한 조건에서 Phs-1-P의 증식효과가 더 크게 남. 따라서 이 물질은 스트레스를 해소하는 능력이 매우 뛰어남을 알 수 있다. [피토스 결과]


스트레스 강도에 따른 혈소판의 S-1-P 분비량 측정
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4. 육모 효능 및 상처치유 효과 시험

효능 시험(I) : C57/BL6 animal model
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효능 시험(II) : C57/BL6 animal model
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효능 시험(III) : C57/BL6 animal model
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효능 시험(IV) : Ba1b/c mice
In vivo efficacy of hair growth in animal model
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Experimental conditions and results
– Application : one time/day for 14 days
– 75% effective rate(perfect), 25%(partial)

효능 시험(상처치유 및 발모) : C57/BL6 animal model
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효능 비교
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Combi : 3% Minoxidil+PhS-1-P

효능 시험(유전형 탈모)
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49세, 유전형 탈모로 30대 후반부터 탈모가 시작되어 40대부터 본격화됨. 피토 페시아토닉 및 샴푸 1년 사용

효능 시험(원형 탈모, 42세 여성)
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5. 연골세포 증식 효과
연골세포 증식에 미치는 PhS-1-P의 효과
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퇴행성관절의 중요한 연골세포 증식에 PhS-1-P의 효과를 검증해 보았다. 연골세포의 배양에 아무런 물질을 첨가하지 않은 control (대조군)과배지에 1ng과 10ng의 Phs-1-P를 첨가한 것과 비교하였다. 그림에서 보는 것 처럼 대조군에서는 증식이 거의 일어나지 않는 반면에, 1mg을 처리한 경우 매우 높은 증식효과를 볼 수 있다. Phytosphingosine-1-phosphate (Phs-1-P)는 rabbit 연골세포 (chondrocyte)의 증식을 매우 낮은 농도에서 촉진하며, 이는 퇴행성관절 치료에 활용할 수 있음

PhS-1-P와 S-1-P의 연골세포 증식 효과 비교
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Rabbit 연골세포외에 Rat chondrocyte (쥐연골세포)를채취하여 S-1-P와 Phs-1-P를 다양한 농도를 첨가하면서 연골세포의 증식효과를 비교한 결과, 100nM에서 많은 차이를 보이고 있으며, S-1-P는 2000nM에서 2배 정도 증식효과를 보이는 반면에, Phs-1-P는 2000nM에서 3배 정도의 증식효과를 보이고 있다. 이 결과에서 PhS-1-P가 S-1-P 보다 연골세포 증식효과가 높은 것을 알 수 있다. 이는 퇴행성관절염 치료에 PhS-1-P가 더 효과적 임을 알 수 있다. [Biochem Biophys Res Communi, 345:67-73, 2006]

6. 상처치유 효과
세포 이동성 실헐
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S-1-P를 처리한 세포는 시간이 지남에 따라 선 안으로 세포가 이동하는 모습을 볼 수 있지만, control의 경우 세포이동이 거의 이루어지지 않는다. 즉, 상처가 생겼을 때에 상처 부위로 세포이동을 촉진한다. [Am J Physiol Cell Physiol, 278:C612-C618, 2000]

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사람혈관내피세포 (HUVEC)를 배양한 후 모식도에서 보는 것처럼, yellow tip을 이용해 중간에 공간을 만든 후 Phs-1-P 처리한 구룹과 대조군을 8시간 지난 후 관찰한 사진임. Phs-1-P 처리군에서 세포 이동이 원할히 일어나고 있음을 알 수 있음 [피토스 결과]

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